高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理,主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中做相對運(yùn)動時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。
結(jié)構(gòu)及功能
HPLC儀一般由溶劑輸送系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)(色譜柱)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理與記錄系統(tǒng)組成,具體包括儲液器、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀或數(shù)據(jù)工作站等幾部分 。其中輸液泵、色譜柱和檢測器是HPLC儀的關(guān)鍵部分 。
1. 溶劑輸送系統(tǒng)
儲液器:用來貯存數(shù)量足夠、符合要求的流動相。配有溶劑過濾器,以防止流動相中的顆粒進(jìn)入泵內(nèi)。
脫氣器:脫氣的目的是為了防止流動相從色譜柱內(nèi)流出時(shí)釋放出氣泡進(jìn)入檢測器,從而引起噪聲,不能正常檢測。
輸液泵:將儲液器中的流動相連續(xù)不斷地以高壓形式進(jìn)入液路系統(tǒng),使樣品在色譜柱中完成分離過程。
梯度洗脫裝置:是在分離過程中通過逐漸改變流動相的組成增加洗脫能力的一種裝置。
2. 進(jìn)樣系統(tǒng)
進(jìn)樣器:是將樣品送入色譜柱的裝置,進(jìn)樣方式可以分為兩種:閥進(jìn)樣或自動進(jìn)樣。比較常用的是采用自動進(jìn)樣器裝樣。
3. 分離系統(tǒng)
色譜柱:對樣品進(jìn)行分離,是整個(gè)色譜系統(tǒng)的心臟,它的質(zhì)量優(yōu)劣直接影響到分離的效果。
4. 檢測系統(tǒng)
檢測器:將色譜柱連續(xù)流出的樣品組分轉(zhuǎn)變成易于測量的電信號,被數(shù)據(jù)系統(tǒng)接收,得到樣品分離的色譜圖。
5. 數(shù)據(jù)處理和記錄系統(tǒng)
對色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,并參與HPLC儀器的自動控制。